白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.46.002

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (46): 7988-7993.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.46.002

• 骨组织构建 bone tissue construction • 上一篇下一篇

白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达

杨子波¹，黄保丁²，向珊珊³，邬培慧¹，张志奇¹，廖威明¹

¹中山大学附属第一医院关节外科，广东省广州市 510080；²中山大学附属第六医院骨科，广东省广州市 510655；³江门市中心医院，广东省江门市 529030

出版日期:2013-11-12 发布日期:2013-11-30
通讯作者: 廖威明，博士，主任医师，博士生导师，中山大学附属第一医院关节外科，广东省广州市 510080 sysugjwk@126.com
作者简介:杨子波☆，男，1977年生，广东省广州市人，汉族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事髋关节及膝关节退行性、先天性疾病及创伤的治疗。 dr_youngball@hotmail.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(81171709)*

Inhibitory effect of interleukin-1 receptor-associated kinase-4 silencing on mitogen-activated protein kinases expression in human osteoblast-like cells

Yang Zi-bo¹, Huang Bao-ding², Xiang Shan-shan³, Wu Pei-hui¹, Zhang Zhi-qi¹, Liao Wei-ming¹

¹Department of Orthopedic & Joint Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China; ² Department of Orthopedics, the Sixth Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510655, Guangdong Province, China; ³ Jiangmen Central Hospital, Jiangmen 529030, Guangdong Province, China

Online:2013-11-12 Published:2013-11-30
Contact: Liao Wei-ming, M.D., Chief physician, Doctoral supervisor, Department of Orthopedic & Joint Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China sysugjwk@126.com
About author:Yang Zi-bo☆, M.D., Attending physician, Department of Orthopedic & Joint Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China dr_youngball@hotmail.com
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81171709

摘要/Abstract

摘要：

背景：造成假体周围骨溶解的完整分子机制目前尚未完全清楚。假体周围骨溶解、吸收是人工关节松动的典型病理生理过程。白细胞介素1通过MAPK信号通路影响骨吸收进程。
目的：实验通过观察siRNA沉默白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4，IRAK-4)基因表达对人成骨样细胞株MG63的MAPK信号转导通路的影响，为防治人工关节置换后假体周围骨溶解提供实验基础。
方法：以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞。实验分为3组，空白组不加入任何转染试剂；对照组以scrambled siRNA序列进行转染；沉默组以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染。Western blot检测靶细胞细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。
结果与结论：与对照组相比，靶基因沉默组的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P < 0.05)。MG63细胞IRAK-4表达下调后，与空白组和对照组相比，c-Jun氨基末端激酶1/2P46、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2、磷酸化p38MAPK表达下调分别为62%，64%，68%(P < 0.05)。结果证实，siRNA沉默IRAK-4基因抑制人成骨样细胞株MG63细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK基因的表达。

关键词: 组织构建, 骨组织构建, 假体周围骨溶解, 无菌性松动, 人成骨样细胞, 白细胞介素1受体相关激酶4, RNA干扰, 基因沉默, 基因转染, 促分裂素原活化蛋白激酶, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The molecular mechanism of periprosthesis osteolysis is not yet completely clear. Periprosthetic osteolysis and absorption is the pathological and physiological process typical of artificial joint loosening. Interleukin-1 can affect bone resorption process through a mitogen-activated protein kinases (MAPK) signaling pathway.
OBJECTIVE: To explore the effects of siRNA-induced interleukin-1 receptor-associated kinase-4 gene (IRAK-4) silence on MAPK expression in MG63 cells, which may provide experimental basis for treatment and prevention of periprosthesis osteolysis.
METHODS: The siRNA sequences of the target gene, IRAK-4, were constructed and transferred into MG63 cells using Lipofectamine 2000. There were three groups: blank group=MG63 cells, control group = MG63 cells transfected with scrambled IRAK-4siRNA, and silence group=MG63 cells transfected with specific IRAK-4 siRNA. The protein level of extracellular regulated kinase (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK) and p38 mitogen- activated protein kinases (p38MAPK) were detected by western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: The expression of IRAK-4 mRNA and protein in the silence group was significantly decreased compared with the control group. Compared with the blank and control groups, 48 hours after the transfection, IRAK-4 gene silencing in MG63 cells decreased protein expression of p-JNK1/2P46, p-ERK1/2 and p-p38MAPK (P < 0.05). IRAK-4 silencing inhibited ERK, JNK and p38MAPK expression in osteoblast-like cells.

Key words: osteoblasts, interleukin-1, gene silencing, genes, regulator, mitogen-activated protein kinases

中图分类号:

R318

杨子波，黄保丁，向珊珊，邬培慧，张志奇，廖威明. 白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(46): 7988-7993.

Yang Zi-bo, Huang Bao-ding, Xiang Shan-shan, Wu Pei-hui, Zhang Zhi-qi, Liao Wei-ming . Inhibitory effect of interleukin-1 receptor-associated kinase-4 silencing on mitogen-activated protein kinases expression in human osteoblast-like cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(46): 7988-7993.

图/表（结果） 2

参考文献

[1]Levine BR, Hsu AR, Skipor AK, et al. Ten-year outcome of serum metal ion levels after primary total hip arthroplasty: a concise follow-up of a previous report. J Bone Joint Surg Am. 2013;95(6):512-518.
[2]Ikeda Y, Tajima S, Izawa-Ishizawa Y, et al. Estrogen regulates hepcidin expression via GPR30-BMP6-dependent signaling in hepatocytes. PLoS One. 2012;7(7):e40465.
[3]Stephens AS, Stephens SR, Hobbs C, et al. Myocyte enhancer factor 2c, an osteoblast transcription factor identified by dimethyl sulfoxide (DMSO)-enhanced mineralization. J Biol Chem. 2011;286(34):30071-30086.
[4]Takanashi M, Oikawa K, Sudo K, et al. Therapeutic silencing of an endogenous gene by siRNA cream in an arthritis model mouse. Gene Ther. 2009;16(8):982-989.
[5]Kwan TS, Padrines M, Théoleyre S, et al. IL-6, RANKL, TNF-alpha/IL-1: interrelations in bone resorption pathophysiology. Cytokine Growth Factor Rev. 2004;15(1): 49-60.
[6]Yang SY, Zhang K, Bai L, et al. Polymethylmethacrylate and titanium alloy particles activate peripheral monocytes during periprosthetic inflammation and osteolysis. J Orthop Res. 2011;29(5):781-786.
[7]Harrison JC, Zyla TR, Bardes ES, et al. Stress-specific activation mechanisms for the “cell integrity” MAPK pathway. J Biol Chem. 2004;279(4):2616-2622.
[8]Suzuki N, Suzuki S, Duncan GS, et al. Severe impairment of interleukin-1 and Toll-like receptor signaling in mice lacking IRAK-4. Nature. 2002;416(6882):750-756.
[9]Vandrovcova M, Hanus J, Drabik M, et al. Effect of different surface nanoroughness of titanium dioxide films on the growth of human osteoblast-like MG63 cells. J Biomed Mater Res A. 2012;100(4):1016-1032.
[10]Zhao H, Dong W, Zheng Y, et al. The structural and biological properties of hydroxyapatite-modified titanate nanowire scaffolds. Biomaterials. 2011;32(25):5837-5846.
[11]Schwartz Z, Bell BF, Wang L, et al. Beta-1 integrins mediate substrate dependent effects of 1alpha,25(OH)2D3 on osteoblasts. J Steroid Biochem Mol Biol. 2007;103(3-5): 606-609.
[12]Vallés G, García-Cimbrelo E, Vilaboa N. Involvement of extracellular Hsp72 in wear particle-mediated osteolysis. Acta Biomater. 2012;8(3):1146-1155.
[13]Ma GK, Chiu R, Huang Z, et al. Polymethylmethacrylate particle exposure causes changes in p38 MAPK and TGF-beta signaling in differentiating MC3T3-E1 cells. J Biomed Mater Res A. 2010;94(1):234-240.
[14]Baud V, Liu ZG, Bennett B, et al. Signaling by proinflammatory cytokines: oligomerization of TRAF2 and TRAF6 is sufficient for JNK and IKK activation and target gene induction via an amino-terminal effector domain. Genes Dev.1999;13(10): 1297-1308.
[15]Ming X. Cellular delivery of siRNA and antisense oligonucleotides via receptor-mediated endocytosis. Expert Opin Drug Deliv. 2011;8(4):435-449.
[16]Samuel-Abraham S, Leonard JN. Staying on message:design principles for controlling nonspecific responses to siRNA. FEBS J. 2010;277(23):4828-4836.
[17]Kim YH, Park JW, Patel C, et al. Polyethylene Wear and Osteolysis After Cementless Total Hip Arthroplasty with Alumina-on-Highly Cross-Linked Polyethylene Bearings in Patients Younger Than Thirty Years of Age. J Bone Joint Surg Am. 2013;95(12):1088-1093.
[18]Kurtz S, Ong K, Lau E, et al. Projections of primary and revision hip and knee arthroplasty in the United States from 2005 to 2030. J Bone Joint Surg Am. 2007;89(4):780-785.
[19]Haynes DR, Crotti TN, Zreiqat H. Regulation of osteoclast activity in peri-implant tissues. Biomaterials. 2004;25(20): 4877-4885.
[20]Stashenko P, Dewhirst FE, Peros WJ, et al. Synergistic interactions between interleukin 1, tumor necrosis factor, and lymphotoxin in bone resorption. J Immunol. 1987;138(5): 1464-1468.
[21]Chen X, Zhu G, Jin T, et al. Cadmium stimulates the osteoclastic differentiation of RAW264.7 cells in presence of osteoblasts. Biol Trace Elem Res. 2012;146(3):349-353.
[22]Lye E, Mirtsos C, Suzuki N, et al. The role of interleukin 1 receptor-associated kinase-4 (IRAK-4) kinase activity in IRAK-4-mediated signaling. J Biol Chem. 2004;279(39): 40653-40658.
[23]Kyo F, Futani H, Matsui K, et al. Endogenous interleukin-6, but not tumor necrosis factor alpha, contributes to the development of toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88-mediated acute arthritis in mice. Arthritis Rheum. 2005;52(8):2530-2540.
[24]Johnson GL, Lapadat R. Mitogen-activated protein kinase pathways mediated by ERK, JNK, and p38 protein kinases. Science. 2002;298(5600):1911-1912.
[25]Song, KW, Talamas FX, Suttmann RT, et al. The kinase activities of interleukin-1 receptor associated kinase (IRAK)-1 and 4 are redundant in the control of in?ammatory cytokine expression in human cells. Mol Immunol. 2009;46(7): 1458-1466.
[26]Koziczak-Holbro M, Littlewood-Evans A, Pöllinger B, et al. The critical role of kinase activity of interleukin-1 receptor-associated kinase 4 in animal models of joint inflammation. Arthritis Rheum. 2009;60(6):1661-1671.
[27]Yang Z, Huang B, Zhang Z, et al. Effects of IL-1 receptor-associated kinase-4 gene silencing on human osteoblast-like cells. Connect Tissue Res. 2012;53(6): 498-507.
[28]Olmedo ML, Landry PS, Sadasivan KK, et al. Regulation of osteoblast levels during bone healing. J Orthop Trauma. 1999;13(5):356-362.
[29]Hipskind RA, Bilbe G. MAP kinase signaling cascades and gene expression in osteoblasts. Front Biosci.1998;3: d804-816.
[30]Lai CF, Chaudhary L, Fausto A, et al. Erk is essential for growth, differentiation, integrin expression, and cell function in human osteoblastic cells. J Biol Chem. 2001;276(17): 14443-14450.

引言

材料方法

设计：随机对照体外实验。

时间及地点：于2012年1至12月在中山大学附属第一医院完成。

材料：

细胞株：人成骨样细胞株MG63细胞株由中山大学附属第一医院骨肿瘤科沈靖南教授惠赠。目的细胞培养于体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养液中，置于体积分数5%CO₂的37 ℃培养箱中生长。

方法：

siRNA序列设计、合成、分组及转染：siRNA序列经BLAST分析排除其他同源编码序列，已在人软骨细胞中筛选出最有效的干扰靶点，序列的化学合成及纯化委托上海吉玛制药技术有限公司完成，全长双链siRNA含量>97%。具体序列信息如下：Sense：5’-GCU CAU GAC AUG CAA GAU UTT-3’，Anti-sense：5’-AAU CUU GCA UGU CAU GAG CTT-3’。

实验分为3组，空白组不加入任何转染试剂；对照组以scrambled siRNA序列进行转染；沉默组以 75 nmol/L终浓度的特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染，转染当天按照上述分组进行目的细胞的转染实验。

实验于转染siRNA前24 h消化目的细胞MG63并计数，60 mm培养皿中接种2×10⁵个细胞，每孔加入含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基；培养过夜，弃培养基，用无血清无抗生素的DMEM培养基洗2遍后每孔加入2.4 mL无血清无抗生素的DMEM/F12培养液；将6 μL Lipofectamine 2000转染试剂加入 300 μL Opti-MEM中，混合均匀后室温孵育5 min；将IRAK-4-siRNA、scrambled siRNA(终浓度均为 75 nmol/L)加入300 μL Opti-MEM中，混合均匀后室温孵育5 min；将Lipofectamine 2000和siRNA均匀混合，室温孵育20 min，以使Lipofectamine-siRNA复合体形成；将Lipofectamine-siRNA混合液(600 μL)加入需转染的孔中，体积分数5%CO₂、37 ℃环境下转染6 h后弃去转染混合液，加入3 mL含体积分数10%胎牛血清高糖DMEM培养基；不同siRNA干扰48 h后弃完全培养液，提取RNA进行RT-PCR的检测和收集总蛋白进入后续Western blot实验。

RNA的提取及real-time PCR检测MG63细胞中IRAK-4 mRNA的表达：转染后48 h提取各组细胞的总RNA用以进行real-time PCR检测各组转染后靶基因沉默的情况。利用Primer Premier 5.0 软件(PREMIER Biosoft international, Palo Alto, CA, USA)进行引物设计，由广州复能基因有限公司合成。

根据Trizol操作说明书进行总RNA的提取操作。反转录操作则根据TOYOBO公司的ReverTra Ace qPCR RT kit试剂盒(FSQ-101；Toyobo, Osaka, Japan)使用说明书进行。Real-time PCR在Applied Biosystems 7500(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)上进行，按Toyobo公司THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix试剂盒(QPS-201；Toyobo, Osaka, Japan)使用说明书配制反应体系。

Real-time PCR反应体系20 μL配方包括：① Thunderbird SYBR qPCR mix (10 μL)。②上/下游引物混合物(2 μL)。③ 50X ROX reference dye (0.04 μL)。④ cDNA模板(2 μL)。⑤ DEPC水(5.96 μL)。设定程序为两步法Real-time PCR检测：预变性95 ℃，60 s，之后每一步变性95 ℃，15 s，退火延伸60℃，60 s，共进行40次循环，每次在延伸阶段读取吸光值。PCR结束后，在95 ℃变性15 s，然后冷却至60 ℃，使DNA双链充分结合，接下来依次于95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，读取吸光度值，完成熔解曲线。Real-time PCR的计算方法：ΔCt(相对表达量)=Ct(目的基因)-Ct(内参)，以2^-ΔΔCt为观测指标。上述步骤均为RNase-free操作。

Western blot检测MG63细胞中IRAK-4蛋白的表达：转染48 h后弃去培养液，根据产品说明书的指引加入RIPA细胞裂解液处理10-15 min。裂解完后，在冰上将细胞碎片和裂解液移至1.5 mL EP管中，超声波细胞破碎仪破碎细胞(200 W，共4次，5 s/次，间隔2 s)，于4 ℃下 12 000 r/min离心10 min，将离心后的上清转移到 0.5 mL的EP管保存。应用BCA蛋白定量试剂盒在紫外分光光度计上描绘蛋白浓度标准曲线，标定样本蛋白浓度。取30 μg蛋白100 ℃变性后以10% SDS-PAGE凝胶电泳分离。在4 ℃，110 V恒压条件下电转移150 min，将蛋白样品转移到PVDF膜上。室温下以TBST+体积分数5%脱脂牛奶封闭1 h。用封闭液按材料部分所示浓度分别稀释目的蛋白或者内参GAPDH的一抗，4 ℃摇床过夜，TBST洗膜3次，每次10 min。用封闭液按材料部分所示浓度稀释与一抗相对应的辣根过氧化物酶羊抗兔二抗，于室温下孵育2 h，TBST洗膜3次，每次10 min。采用ECL检测液进行化学发光反应，曝光显影。制成胶片后扫描形成图像文件，应用GlycoBandScan 5.0软件(ProZyme, Hayward, CA, USA) 直接记录条带灰度值，并设置GAPDH为内参。

Western blot检测MG63细胞中MAPK通路各蛋白的表达：Western blot检测p-JNK、p-ERK、p-p38MAPK蛋白表达的方法同IRAK-4蛋白检测方法。

主要观察指标：先进行RNA的提取及real-time PCR检测IRAK-4 mRNA的表达，然后应用Western blot检测IRAK-4蛋白的表达，最后应用Western blot检测MAPK通路各蛋白的表达情况。

统计学分析：所有数据均以x(_)±s的形式表达，采用SPSS 18.0统计学软件(SPSS, Chicago, IL, USA)进行统计学分析，统计绘图以GraphPad Prism 5.01软件完成。各组间差别的比较应用基于单因素方差分析的Tukey’s检验，如方差不齐时则改用Dunnett’s T3检验，检验水准α=0.05。

讨论

利用siRNA沉默靶基因达到临床治疗效果，已经越来越受到重视^[15-16] 。实验不仅构建了有效沉默IRAK-4基因表达的siRNA，并通过转染人成骨样细胞，进一步在细胞层面证实了抑制IRAK-4基因表达能对MAPK通路蛋白的表达产生下调的效果。下面就相关问题予以讨论。
3.1 白细胞介素1胞内信号通路与假体周围骨溶解的关系 在美国，目前估计每年均有超过150 000例人工髋关节置换和逾500 000例人工膝关节置换^[17-18] 。其中，无菌性松动被认为是假体失效的最常见原因^[1] 。无菌性松动以假体磨损形成颗粒诱导的慢性炎症反应为特征，导致假体周围的骨吸收(骨溶解)并使假体固定机制失效^[19] 。尽管骨吸收作用主要由破骨细胞介导^[20] ，但研究表明，相对于破骨细胞，成骨细胞表达更多与溶骨相关的细胞因子和激素表面受体^[21] ，提示成骨细胞在骨溶解当中为破骨细胞的活化提供了相应的信号通路，意味着在正常骨组织的代谢过程中，成骨细胞不仅仅扮演骨形成的角色，同时也在发挥着调控骨吸收的作用。而成骨细胞的活性除受细胞间直接接触所出现的信号调控外，各种多肽因子以及它们的受体下游所形成的级联反应也在细胞的分化和功能激活上起到重要的作用。有研究表明假体材料颗粒周围存在白细胞介素1的高表达^[6] 。白细胞介素1受体通路的各个蛋白均被认为在对抗感染和自身免疫性疾病的病理机制中扮演重要角色^[22] ，例如MyD88缺陷的小鼠可有效对抗葡萄球菌壁诱导的关节炎^[23] 。提示对白细胞介素1在成骨细胞胞内信号通路的深入研究有助于增进对假体周围骨溶解机制的认识。
3.2 白细胞介素1与MAPK胞内信号传导通路的关系 MAPK通路是细胞外界信号从细胞表面转导到细胞核内部引起细胞核反应的共同通路^[7] 。目前，研究较多的MAPK信号转导通路包括：①细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)通路；② c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase, JNK)通路；③p38MAPK通路^[24] 。不同的研究提示白细胞介素1受体胞内信号通路除经过核转录因子kB外，还通过P38和JNK这两条MAPK通路激活并继而促进各种促炎细胞因子和化学物质等的产生^{[14, 25]} 。
3.3 沉默IRAK-4的表达抑制成骨细胞增殖 作为白细胞介素1受体信号通路中的关键蛋白^[8] ，对IRAK-4的表达改变与成骨细胞增殖与活性之间关系的研究甚少。Magdalena等^[26]曾对IRAK-4基因敲除的小鼠关节进行的组织学研究，发现由KRNxNOD (K/BxN)血清诱导的炎症性骨溶解减少。课题组前期研究则发现IRAK-4基因沉默后，成骨细胞增殖受抑^[27] 。目前已有很多文献探讨白细胞介素1与成骨细胞增殖和活性之间的关系。其中，有研究显示白细胞介素1对成骨细胞增殖有促进作用^[28] 。由于IRAK-4是白细胞介素1受体信号通路上的关键转接蛋白，因此该基因表达沉默将导致白细胞介素1胞内信号传导中断，可能是继发成骨细胞增殖受抑制的原因之一，并可能进一步参与骨溶解的发生。在此基础上，作者努力寻找siRNA沉默IRAK-4表达抑制成骨细胞增殖与胞内信号通路之间的关系。
3.4 siRNA干扰IRAK-4，抑制MAPK信号通路蛋白激活 实验结果显示特异性IRAK-4-siRNA转染靶细胞后，与对照组相比，实验组IRAK-4 mRNA的表达明显下调，同时，IRAK-4蛋白的表达量与对照组相比，差异也有显著性意义。说明所用特异性siRNA介导的RNA干扰能够有效沉默靶基因的表达。在MG63细胞IRAK-4表达下调后，p-JNK1/2，p-ERK1/2和p-p38MAPK表达均有不同程度的下调。提示IRAK-4作为白细胞介素1受体在胞内信号转导通路的关键分子，对其下游的各条常见MAPK通路均有影响。
如前文所述，白细胞介素1受体胞内信号通路通过P38和JNK这两条MAPK通路激活并继而促进各种促炎细胞因子和化学物质等的产生^{[14, 25]} 。但本次实验则提示，IRAK-4表达沉默后对各条MAPK信号通路都有影响，包括ERK通路。提示细胞内IRAK-4表达的改变对下游因子的影响可能还有其他未知的途径。而这些在成骨样细胞中ERK，JNK和p38MAPK的激活表现是IRAK-4激活的直接结果还是有其他中间途径目前也还不完全清楚。已知ERK，p38MAPK和JNK通路均参与了成骨细胞分化增殖的信号转导，并在应激、凋亡及骨质代谢、炎症中发挥重要作用^[29-30] 。这些研究提示，此前实验中IRAK-4基因沉默后造成的成骨样细胞增殖受抑可能与IRAK-4基因表达下调后对ERK，JNK和p38MAPK等MAPK信号转导通路的影响有关，实验推测假体周围的炎症环境有可能经IRAK-4进而通过MAPK通路影响到成骨细胞的增殖并改变局部的骨重建。但诱导各个MAPK通路激活的具体分子机制及各条MAPK通路的相互关系仍有待进一步研究。由于MAPK通路是细胞外信号转导到细胞核内部引起细胞核反应的重要通路，IRAK-4与各条MAPK通路的关系值得作更深入的探讨，这将有助于增进对假体周围炎症环境中各种细胞因子相互关系的认识。
综上所述，实验利用有效沉默IRAK-4表达的siRNA序列转染人成骨样细胞，结果提示MG63细胞的p-JNK1/2，p-ERK1/2和p-p38MAPK表达均有不同程度的下调。IRAK-4基因表达改变后，可能通过对MAPK通路的影响抑制成骨细胞增殖，并进一步参与假体周围炎症性骨溶解的发生机制。由于目前对于IRAK-4在炎症性骨溶解中的角色尚不清楚，本次实验将有助于了解IRAK-4与成骨样细胞间的关系，完善对假体周围炎症环境的认识。因此，对IRAK-4在炎症性骨溶解中的角色的完整阐释需要对假体周围炎症环境有更进一步了解后才可能实现。

白细胞介素1受体相关激酶4基因沉默抑制人成骨样细胞相关基因的表达

Inhibitory effect of interleukin-1 receptor-associated kinase-4 silencing on mitogen-activated protein kinases expression in human osteoblast-like cells

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 2

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	梅运运, 张建军, 王东. 高压氧联合NgR基因沉默骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 12-19.
[2]	王晗月, 李富荣, 杨晓菲, 胡巢凤. 高效靶向激活肝细胞内源基因直接重编程为胰岛样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1056-1063.
[3]	袁丽粉, 曹爽, 孙婷. 靶向血管紧张素原RNA干扰对自发性高血压模型大鼠的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(35): 5626-5631.
[4]	陆逸卿, 何斌, 王伯尧, 秦虎, 范磊, 王云华. 股骨假体无菌性松动翻修中应用的 SLR-PLUS生物型加长矩形柄[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(27): 4318-4321.
[5]	魏聪聪, 姚孟轩, 杨梦, 李会杰. 人工关节假体周围骨溶解的机制和治疗策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(27): 4401-4407.
[6]	路坦, 常耀辉, 尉娜. 脂氧素A4对脊髓缺血再灌注损伤模型大鼠的神经保护[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(26): 4175-4179.
[7]	徐桂兰, 宋建生, 杨世疆. 超声微泡沉默S100A4基因对胃癌干细胞干性和上皮间质转化的调控[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 4025-4031.
[8]	王秋霏, 顾叶, 彭育沁, 薛峰, 巨荣, 朱锋, 王熠军, 耿德春, 徐耀增. 人工假体磨损颗粒作用下Wnt/β-catenin信号通路对成骨细胞的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(24): 3894-3901.
[9]	蒋昇源, 李丹, 姜建浩, 杨上游, 杨淑野. 假体无菌性松动过程中Co2+对成骨前体细胞的生物学反应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(21): 3292-3299.
[10]	刘子歌, 刘心蕊, 李燕, 宋国瑞, 张晨, 陈德胜. 汉防己甲素干预假体周围磨损颗粒诱导下骨溶解模型的体外实验[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(15): 2358-2363.
[11]	赵春涛, 卿明松, 余浪波, 彭笳宸. 运动学对线和机械力学对线指导全膝关节置换效果的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(9): 1435-1442.
[12]	涂鹏程, 郭杨, 马勇, 潘娅岚, 郑苏阳, 王礼宁, 吴承杰, 过俊杰. 威灵仙提取物可促进体外牵张应力环境下软骨细胞表型的维持[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1182-1187.
[13]	张聪, 赵岩, 杜小宇, 杜欣瑞, 庞廷娟, 付怡凝, 张浩, 张步洲, 李筱贺, 王利东. 青少年特发性脊柱侧凸腰主弯患者腰椎-骨盆的生物力学分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1155-1161.
[14]	许国峰, 李学斌, 唐一钒, 赵寅, 周盛源, 陈雄生, 贾连顺. 人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1174-1181.
[15]	周玉, 龙小安, 李宁, 王纯. 有限元法分析髌腱炎状态时的生物力学变化[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1280-1286.